Active Factor Related Apoptosis (FAS) (APA030Hu61)

Белок FAS (член 6 суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли) содержит домен смерти и играет ключевую роль в физиологической регуляции программируемой клеточной гибели. Для детекции ассоциации FAS с лигандом FASL проводили связывающий иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: FASL серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% БСА (pH 7,4). По 100 мкл раствора FASL вносили в лунки планшета, покрытого белком FAS, и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали с поликлональными антителами к FASL в течение 1 ч, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее вносили вторичные антитела, меченные пероксидазой хрена (HRP), после чего лунки аспирировали и промывали пятикратно. Добавляли субстратный раствор и инкубировали 15–25 мин при 37 °C. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Активность связывания FAS и FASL представлена на рис. 1; эффект носил дозозависимый характер, значение EC50 составило приблизительно 0,044 мкг/мл.