Active Fibroblast Growth Factor 12 (FGF12) (APC914Hu01)

Фактор роста фибробластов 12 (FGF12) является членом семейства факторов роста фибробластов (FGF), представители которого обладают широким спектром митогенной активности и способствуют выживанию клеток, участвуя в различных биологических процессах, включая эмбриональное развитие, рост клеток, морфогенез, репарацию тканей, рост и инвазию опухолей. FGF12 может выступать важным модулятором активности нейронных сетей и ассоциирован с developmental and epileptic encephalopathy (DEE). Кроме того, сообщается, что оба домена (Ca2+)4-CaM напрямую связываются с высокой аффинностью с двумя участками N-концевого домена (NTD) A-типов сплайс-вариантов FGF (FGF11A, FGF12A, FGF13A и FGF14A). Кальмодулин 1 (CALM1) идентифицирован как партнер взаимодействия FGF12, в связи с чем был проведен иммуноферментный анализ (ELISA) связывания для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого FGF12 и рекомбинантного человеческого CALM1. Кратко: FGF12 последовательно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые CALM1, и инкубировали в течение 1 ч при 37°C. Лунки промывали PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к FGF12, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), в течение 1 ч при 37°C, раствор удаляли и проводили пятикратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. Наконец, в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450/630 нм. Активность связывания рекомбинантного человеческого FGF12 и рекомбинантного человеческого CALM1 представлена на рисунке 1; значение EC50 для данного эффекта составляет 4,44 мкг/мл.