Active Fibroblast Growth Factor 18 (FGF18) (APC907Hu02)

Фактор роста фибробластов 18 (FGF-18) - это белок с молекулярной массой 20 кДа, играющий важную роль в развитии скелета и костном гомеостазе. Он экспрессируется в эмбриональных сомитрах и нервных валиках, а также в легких взрослых особей, нейронах мозжечка и гиппокампа. FGF-18 связывается с рецепторами FGF R2c, FGF R3c, а также с белком аппарата Гольджи GLG1, индуцируя пролиферацию астроцитов, микроглии, эндотелиальных клеток сосудов, дермальных фибробластов, клеток сосочка и кератиноцитов. FGF-18 необходим для нормального развития скелета. Для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого FGF18 и рекомбинантного человеческого FGFR1 был проведен функциональный иммуноферментный анализ (ИФА) связывания. Кратко: FGF18 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые FGFR1, и инкубировали в течение 1 ч при 37°C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к FGF18, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Затем лунки инкубировали с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), в течение 1 ч при 37°C, после чего раствор удаляли и проводили пятикратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длинах волн 450/630 нм. Активность связывания рекомбинантного человеческого FGF18 и рекомбинантного человеческого FGFR1 представлена на рисунке 1; значение EC50 для данного эффекта составляет 0,26 мкг/мл.