Active Fibroblast Growth Factor 19 (FGF19) (APC917Hu01)

Фактор роста фибробластов 19 (FGF19) относится к семейству факторов роста фибробластов (FGF), представляющих собой гепарин-связывающие белки с консервативным доменом из 120 аминокислот, определяющим общую третичную структуру. Обычно FGFs экспрессируются в ходе эмбрионального развития и в ограниченном наборе тканей взрослого организма. Предшественник человеческого FGF-19, предсказанный по кДНК, состоит из 251 аминокислоты, включая сигнальный пептид из 22 аминокислот и зрелый секретируемый белок из 229 аминокислот, не содержащий потенциальных сайтов N-гликозилирования. Пара транскриптов FGF19–FGFR1 опосредует взаимодействие между внезародышевыми оболочками и эндометрием. Для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого FGF19 и рекомбинантного человеческого FGFR1 был проведен функциональный иммуноферментный анализ (ИФА) связывания. Кратко: FGF19 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА), pH 7,4. Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые FGFR1, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к FGF19, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее добавляли вторичное антитело, меченное пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трижды промывали лунки. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Активность связывания рекомбинантного человеческого FGF19 с рекомбинантным человеческим FGFR1 представлена на рис. 1; значение EC50 для данного эффекта составляет 3,83 мкг/мл.