Active Fibroblast Growth Factor 19 (FGF19) (APC917Hu61)

Фактор роста фибробластов 19 (FGF19), являющийся членом семейства факторов роста фибробластов (FGF), выполняет функции гормона, синтезируемого в подвздошной кишке в ответ на абсорбцию желчных кислот; он регулирует синтез новых желчных кислот, действуя через рецепторные комплексы FGFR4/Клото-β в печени и ингибируя CYP7A1, а также влияет на метаболизм глюкозы и липидов. Поскольку рецептор фактора роста фибробластов 4 (FGFR4) идентифицирован как партнер взаимодействия FGF19, был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого FGF19 и рекомбинантного человеческого FGFR4. Кратко: FGFR4 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые FGF19, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к FGFR4, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Затем лунки инкубировали с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), удаляли раствор и снова промывали три раза. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания FGF19 и FGFR4 представлена на рис. 1; эффект носил дозозависимый характер, значение EC50 составило приблизительно 0,016 мкг/мл.