Active Fibroblast Growth Factor 2, Basic (FGF2) (APA551Po01)

Основной фактор роста фибробластов (FGF2), также известный как bFGF или FGF-β, представляет собой член большого семейства структурно родственных гепарин-связывающих белков (FGF), участвующих в регуляции клеточной пролиферации, роста и дифференцировки. Он задействован во многих биологических процессах, включая ангиогенез, эмбриональное развитие и заживление ран. Кроме того, FGF2 является критическим компонентом среды для культивирования эмбриональных стволовых клеток человека. Поскольку каспаза-1 (CASP1) была идентифицирована как партнер по взаимодействию с FGF2, был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия рекомбинантного FGF2 свиньи и рекомбинантной CASP1 свиньи. Кратко: FGF2 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые CASP1, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к FGF2, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), раствор удаляли и лунки промывали три раза. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания FGF2 и CASP1 представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.