Active Fibronectin (FN) (APA037Hu02)

Фибронектин (FN) представляет собой высокомолекулярный (~440 кДа) гликопротеин внеклеточного матрикса, связывающийся с трансмембранными рецепторными белками - интегринами. Фибронектин взаимодействует с поверхностью клеток и различными соединениями, включая коллаген, фибрин, гепарин, ДНК и актин. Он выполняет множество функций, таких как обеспечение клеточной адгезии и подвижности, опсонизация, заживление ран и поддержание формы клетки. Поскольку фактор роста соединительной ткани (CTGF) идентифицирован как партнер взаимодействия FN, для детекции связи между рекомбинантным человеческим FN и рекомбинантным человеческим CTGF был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: FN серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые CTGF, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами против FN, затем содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее следовала инкубация с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего снова выполняли удаление содержимого и трехкратную промывку. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания FN и CTGF представлена на рисунке 1; наблюдалась дозозависимая динамика этого эффекта.