Active Fibronectin (FN) (APA037Mu01)

Фибронектин (FN) представляет собой высокомолекулярный (~440 кДа) гликопротеин внеклеточного матрикса, связывающийся с трансмембранными рецепторными белками - интегринами. Фибронектины взаимодействуют с поверхностью клеток и различными соединениями, включая коллаген, фибрин, гепарин, ДНК и актин, выполняя множество функций, таких как адгезия и миграция клеток, опсонизация, заживление ран и поддержание формы клетки. Поскольку декорин (DCN) идентифицирован как партнер взаимодействия FN, для детекции связывания рекомбинантного мышиного FN с рекомбинантным мышиным DCN был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: FN серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые DCN, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к FN, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), лунки снова промывали три раза. Добавляли субстратный раствор и инкубировали 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания FN с DCN представлена на рисунке 1 и демонстрирует дозозависимый характер.