Влияние рекомбинантного белка FBLN2 на жизнеспособность клеток A549
Фибрулин-2 (FBLN2) является вторым по величине представителем семейства внеклеточных гликопротеинов фибрулинов, состоящего из семи членов. Известно, что данный белок образует связанные дисульфидными связями гомодимеры, однако может секретироваться и в виде олигомера. FBLN2 считается многофункциональным белком связывания благодаря ассоциации с многочисленными компонентами внеклеточного матрикса (ВКМ), хотя его специфические взаимодействия до конца не определены. Белок локализован на границе раздела между микрофибриллами и эластиновым ядром; к известным партнерам его связывания относятся нидоген-1, перлекан, ламинин, аггрекан, эндостатины, версикан, коллаген и тропоэластин. Экспрессия FBLN2 снижена при многих формах рака, включая рак молочной железы, колоректальный рак, рак легких, пищевода и плоскоклеточную карциному, однако при солидных опухолях наблюдается его сверхэкспрессия. Для оценки влияния FBLN2 на апоптоз клеток линии A549 клетки высевали в трех повторностях в 96-луночные планшеты из расчета 4000 клеток на лунку и оставляли для адгезии на ночь, после чего среду заменяли на среду DMEM с добавлением 5% сыворотки, содержащую рекомбинантный мышиный FBLN2 в различных концентрациях. После 72 ч инкубации клетки исследовали с помощью инвертированного микроскопа, а пролиферацию клеток оценивали с использованием набора CCK-8 (Cell Counting Kit-8). Кратко: в каждую лунку планшета добавляли по 10 мкл раствора CCK-8, затем после 1 ч инкубации при 37°C измеряли оптическую плотность при 450 нм на микропланшетном ридере. Результаты наблюдения за пролиферацией клеток A549 после 72 ч инкубации с FBLN2 с помощью инвертированного микроскопа представлены на рис. 1. Жизнеспособность клеток оценивали методом CCK-8 после 72 ч инкубации с рекомбинантным мышиным FBLN2; результаты показаны на рис. 2. Было установлено, что FBLN2 достоверно подавляет жизнеспособность клеток A549. Значение ED50 составило 1,25 мкг/мл.
