Гемагглютинация эритроцитов кролика рекомбинантным галектином-7
Галектины представляют собой большое семейство белков, связывающих углеводы, со специфичностью к гликопротеинам, содержащим N-ацетиллактозамин. Идентифицировано по меньшей мере 14 mammalian галектинов, имеющих структурное сходство в доменах распознавания углеводов (CRD). Галектины классифицируют на прототипические галектины (-1, -2, -5, -7, -10, -11, -13, -14), содержащие один CRD и существующие в виде мономера или нековалентного гомодимера; химерные галектины (галектин-3), содержащие один CRD, связанный с нелектиновым доменом; и тандемно-повторяющиеся галектины (-4, -6, -8, -9, -12), состоящие из двух CRD, соединенных линкерным пептидом. Галектин-7 также может участвовать в межклеточных и клеточно-матриксных взаимодействиях; показано, что экзогенный галектин ускоряет реэпителизацию ран. Он способен агглютинировать эритроциты. В данном исследовании для оценки агглютинирующей способности были выбраны эритроциты кролика (RaE). Общая процедура анализа гемагглютинации (HA) следующая: рекомбинантный Mu GAL7 двукратно разводили 0,9% раствором натрия хлорида для инъекций; по 50 мкл серийных разведений GAL7 вносили в каждую лунку 96-луночного планшета с U- или V-образным дном. Последняя лунка служила отрицательным контролем без GAL7, куда вместо него добавляли 50 мкл 0,9% раствора натрия хлорида для инъекций. Затем в каждую лунку добавляли по 50 мкл 1% суспензии эритроцитов кролика и осторожно перемешивали. Планшет инкубировали в течение 3 часов при комнатной температуре. Результаты представлены на рисунке 1. Было установлено, что минимальная эффективная концентрация GAL7 составляет 3,125 мкг/мл.
