Active Galectin 9 (GAL9) (APA309Hu01)

Галектин-9 (GAL9) относится к семейству галектинов, характеризующихся специфичностью связывания с β-галактозидными сахарами, такими как N-ацетиллактозамин (Galβ1-3GlcNAc или Galβ1-4GlcNAc). Сообщается, что GAL9 индуцирует гибель Т-хелперов 1-го типа (Th1) посредством связывания с рецептором 2 клеточного вируса гепатита А (HAVCR2); кроме того, взаимодействие между GAL9 и дисульфид-изомеразой (PDI) приводит к повышению дисульфид-редуктазной активности на плазматической мембране, что изменяет редокс-статус мембраны и усиливает миграцию клеток. В связи с этим был проведен иммуноферментный анализ (ELISA) для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого GAL9 отдельно с рекомбинантным человеческим HAVCR2 и рекомбинантным человеческим PDI. Кратко: GAL9 последовательно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА), pH 7,4. Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые HAVCR2 или PDI, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к GAL9, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена (HRP), лунки снова опорожняли и трехкратно промывали. Затем добавляли субстратный раствор и инкубировали лунки в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длине волны 450 нм. Активность связывания GAL9 с HAVCR2 и PDI представлена на рисунках 1 и 2; данный эффект носил дозозависимый характер.