Active Glypican 4 (GPC4) (APA998Mu01)

Гликпикан-4 (GPC4) представляет собой трансмембранный гепарансульфатный протеогликан, якорный белок которого связан с цитоплазматической мембраной посредством гликозилфосфатидилинозитоловой связи; данные белки могут участвовать в регуляции клеточного деления и роста. Поскольку фактор роста фибробластов 2 (FGF2) идентифицирован как партнер взаимодействия GPC4, для детекции связывания рекомбинантного мышиного GPC4 и рекомбинантного мышиного FGF2 был проведен иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: GPC4 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые FGF2, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к GPC4, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее следовала инкубация с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего раствор удаляли и лунки промывали три раза. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Результаты, представленные на рисунке 1, демонстрируют связывание GPC4 с FGF2, которое носит дозозависимый характер.