Active Golgi Phosphoprotein 2 (GOLPH2) (APB668Mu01)

Белок Golgi Protein 73 (GP73), также известный как голджи-фосфопротеин 2 или мембранный белок голджи GP73, кодируется геном GOLM1. Комплекс Гольджи играет ключевую роль в сортировке и модификации белков, экспортируемых из эндоплазматического ретикулума. Известно, что экспрессия GP73 повышается при вирусных инфекциях. Поскольку было установлено, что белок Dymeclin (DYM) взаимодействует с GP73, для детекции данного взаимодействия был проведен иммуноферментный анализ (ИФА) связывания с использованием рекомбинантного мышиного GP73 и рекомбинантного человеческого DYM. Кратко: GP73 последовательно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА), pH 7,4. Образцы объемом 100 мкл в двух повторностях вносили в лунки планшета, покрытые DYM, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки лунок буфером PBST в них вносили поликлональные антитела к GP73 и инкубировали 1 ч, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее добавляли вторичные антитела, меченные пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм. Активность связывания между GP73 и DYM представлена на рисунке 1; наблюдалась дозозависимая реакция.