Active Granzyme K (GZMK) (APB209Hu01)

Гранзим K относится к семейству сериновых протеаз, локализованных в цитотоксических гранулах цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) и натуральных киллеров (НК-клеток). Человеческий гранзим K синтезируется в виде предшественника (264 аминокислотных остатка), содержащего сигнальный пептид (остатки 1–24), пропептид (остатки 25–26) и зрелую цепь (остатки 27–264). Очищенный рекомбинантный человеческий гранзим K состоит из остатков 27–264; его активность оценивали по способности расщеплять тиоэфирный субстрат Z-Lys-SBzl HCl. Реакцию проводили в буфере для анализа (0,05 М Tris, 0,15 М NaCl, 0,01% Triton X-100, pH 8,0), инициируя добавлением 50 мкл различных концентраций GZMK (разведенных в буфере для анализа) к 50 мкл смеси субстрата (1,2 мМ) и DTNB. В качестве отрицательного контроля использовали лунку без GZMK, куда добавляли 50 мкл буфера для анализа. Инкубацию проводили при 25°C в течение 5 мин, после чего измеряли оптическую плотность при длине волны 405 нм. Удельная активность рекомбинантного человеческого гранзима K составляет >220 пмоль/мин/мкг.