Active Granzyme K (GZMK) (APB209Mu01)

Гранзим K относится к семейству сериновых протеаз, локализованных в цитотоксических гранулах цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) и натуральных киллеров (NK-клеток). Гранзим K мыши синтезируется в виде предшественника (263 аминокислотных остатка), содержащего сигнальный пептид (остатки 1–21), пропептид (остатки 22–25) и зрелую цепь (остатки 26–263). Активность рекомбинантного гранзима K мыши оценивали по способности расщеплять тиоэфирный субстрат Z-Lys-SBzl HCl. Реакцию проводили в буферном растворе (0,05 М Tris, 0,15 М NaCl, 0,01% Triton X-100, pH 8,0), инициируя добавлением 50 мкл различных концентраций GZMK (разведенных в assay-буфере) к 50 мкл смеси субстрата (1,2 мМ) и DTNB. В качестве отрицательного контроля использовали лунку без GZMK, куда добавляли 50 мкл assay-буфера. Инкубацию проводили при 25°C в течение 5 мин, после чего измеряли оптическую плотность при длине волны 405 нм. Удельная активность рекомбинантного гранзима K мыши составляет >70 пмоль/мин/мкг.