Active Granzyme M (GZMM) (APA431Hu01)

Гранзим M (GZMM) относится к нейтральным сериновым протеазам, специфически экспрессируемым NK-клетками и опосредующим новый основной путь гибели клеток, зависимый от перфорина. Доказано, что гранзим M воздействует на α-тубулин, нарушая организацию микротрубочек; кроме того, в качестве его субстрата идентифицирован эзрин. Человеческий гранзим M синтезируется в виде предшественника (264 аминокислотных остатка), включающего сигнальный пептид (остатки 1–23), пропептид (остатки 24–25) и зрелую цепь (остатки 26–257). Очищенный рекомбинантный человеческий гранзим M содержит остатки с 26-го по 257-й; его активность оценивали по способности расщеплять тиоэфирный субстрат Z-Lys-SBzl·HCl. Реакцию проводили в буфере для анализа (0,05 М Tris, 0,15 М NaCl, 0,01% Triton X-100, pH 8,0), инициируя добавлением 50 мкл различных концентраций GZMM (разведенных в буфере для анализа) к 50 мкл смеси, содержащей 1,2 мМ субстрата и DTNB. В качестве отрицательного контроля использовали лунку без GZMM, куда добавляли 50 мкл буфера для анализа. Инкубацию проводили при 25°C в течение 5 мин, после чего измеряли оптическую плотность при длине волны 405 нм. Удельная активность рекомбинантного человеческого гранзима M составляет >80 пмоль/мин/мкг.