Active Gremlin 1 (GREM1) (APC128Mu01)

Гремин-1 (GREM1) является ингибитором сигнального пути TGF-бета; антагонисты BMP, включая GREM1, играют важную роль в выживании и пролиферации стромы опухоли при некоторых видах рака. Экспрессия данного белка обнаруживается при многих злокачественных новообразованиях и, как полагают, имеет важное значение при карциномах шейки матки, легких, яичников, почек, молочной железы, толстой кишки, поджелудочной железы, а также при саркомах. Для оценки биологической активности рекомбинантного мышиного GREM1 был проведен анализ пролиферации с использованием клеток линии A549. Кратко: клетки A549 высевали в трех повторностях в 96-луночные планшеты из расчета 5000 клеток на лунку и оставляли для адгезии; затем среду заменяли на бессывороточную на ночь, после чего перед добавлением GREM1 в различных концентрациях среду заменяли на стандартную DMEM с 2% сыворотки. После 96 ч инкубации клетки исследовали с помощью инвертированного микроскопа, а пролиферацию оценивали с использованием набора Cell Counting Kit-8 (CCK-8). Кратко: в каждую лунку планшета добавляли по 10 мкл раствора CCK-8, затем после инкубации планшета в течение 1–4 ч при 37°C измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм на микропланшетном ридере. На рисунке 1 показана пролиферация клеток A549 после 96 ч инкубации с GREM1, оцененная с помощью инвертированного микроскопа. На рисунке 2 представлены результаты оценки жизнеспособности клеток методом CCK-8 после 96 ч инкубации с рекомбинантным GREM1. Очевидно, что GREM1 достоверно повышал жизнеспособность клеток A549. (A) Клетки A549, культивированные в среде DMEM и стимулированные GREM1 в концентрации 0,001 нг/мл в течение 96 ч; (B) Нестимулированные клетки A549, культивированные в среде DMEM в течение 96 ч.

На рисунке представлена пролиферация клеток линии A549 после стимуляции белком GREM1.