Active Growth Differentiation Factor 15 (GDF15) (APC034Hu62)

Фактор дифференцировки роста 15 (GDF-15), также известный как макрофагальный ингибирующий цитокин 1 (MIC-1), является дивергентным членом суперсемейства трансформирующего фактора роста бета (TGF-beta). Аминокислотная последовательность человеческого GDF-15 имеет 66% и 68% гомологии с белками крысы и мыши соответственно. GDF-15 высоко экспрессируется в плаценте и головном мозге, а также присутствует в более низких уровнях в почках, поджелудочной железе, предстательной железе и толстой кишке. Как и другие белки семейства TGF-beta, GDF-15 синтезируется в виде крупного белка-предшественника, который расщепляется по сайту расщепления, содержащему две основные аминокислоты (RxxR), с высвобождением зрелого белка. Биологически активный GDF-15 представляет собой дисульфид-связанный гомодимер зрелого белка. Показано, что GDF-15 выполняет различные функции, включая ингибирование продукции фактора некроза опухоли альфа (TNF-alpha) липополисахарид-стимулированными макрофагами и индукцию формирования хрящевой ткани. Для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого GDF-15 и рекомбинантного человеческого рецептора трансформирующего фактора роста бета II типа (TGFbR2) был проведен функциональный иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: биотинилированный GDF-15 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл переносили в лунки микротитровального планшета, покрытые TGFbR2, и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. Лунки трижды промывали буфером PBST, после чего инкубировали со стрептавидин-пероксидазой хрена (HRP) в течение 30 мин; затем раствор удаляли и лунки промывали пять раз. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длине волны 450 нм. Активность связывания GDF-15 с TGFbR2 представлена на рисунке 1; значение EC50 для данного эффекта составило 7,002 мкг/мл.