Active Growth Differentiation Factor 15 (GDF15) (APC034Ra01)

Фактор роста и дифференцировки 15 (GDF-15), также известный как цитокин-1, ингибирующий макрофаги (MIC-1), является дивергентным членом суперсемейства трансформирующего фактора роста бета (TGF-beta). Аминокислотная последовательность человеческого GDF-15 имеет гомологию 66% и 68% с белками крысы и мыши соответственно. GDF-15 высоко экспрессируется в плаценте и головном мозге, а также в меньших количествах - в почках, поджелудочной железе, предстательной железе и толстой кишке. Как и другие белки семейства TGF-beta, GDF-15 синтезируется в виде крупного белка-предшественника, который расщепляется по сайту расщепления, содержащему две основные аминокислоты (RxxR), с высвобождением зрелого белка. Биологически активный GDF-15 представляет собой ковалентный гомодимер зрелого белка, стабилизированный дисульфидными связями. Показано, что GDF-15 обладает различными функциями, включая ингибирование продукции фактора некроза опухоли альфа (TNF-alpha) липополисахарид-стимулированными макрофагами и индукцию хондрогенеза. Для детекции взаимодействия рекомбинантного GDF-15 крысы и рекомбинантного человеческого GP9 был проведен функциональный иммуноферментный анализ (ИФА) связывания. Кратко: GDF-15 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые GP9, и инкубировали в течение 1 ч при 37°C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к GDF-15, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Затем лунки инкубировали в течение 1 ч при 37°C с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего раствор удаляли и проводили пятикратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длинах волн 450/630 нм. Активность связывания GDF-15 и GP9 представлена на рисунке 1; значение EC50 для данного эффекта составило 0,47 мкг/мл.