Active Growth Differentiation Factor 9 (GDF9) (APA427Hu01)

Фактор роста/дифференцировки 9 (GDF9), относящийся к суперсемейству трансформирующего фактора роста-бета (TGF-β), необходим для фолликулогенеза в яичниках и стимулирует развитие примордиальных фолликулов. Поскольку с помощью метода дрожжевого двухгибридного анализа было выявлено взаимодействие между GDF9 и белком S100A8, для подтверждения связи рекомбинантного человеческого GDF9 и рекомбинантного человеческого S100A8 был проведен иммуноферментный анализ (ИФА) связывания. Кратко: GDF9 последовательно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые S100A8, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к GDF9, затем содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее следовала инкубация с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего снова проводили удаление содержимого и трехкратную промывку. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора в каждую лунку и немедленно измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм. Активность связывания GDF9 и S100A8 представлена на рисунке 1; наблюдалась дозозависимая динамика эффекта.