Active Growth Hormone (GH) (APA044Hu01)

Гормон роста (GH), также известный как соматотропин, представляет собой одноцепочечный полипептид из 191 аминокислоты, продуцируемый соматотропными ацидофильными клетками передней доли гипофиза. Его синтез строго регулируется сложными механизмами обратной связи в ответ на стресс, физическую нагрузку, питание, сон и уровень самого гормона роста. Показано, что аннексин A2 (ANXA2) играет множественные роли в процессах роста, развития и метаболизма, являясь при этом рецептором высокого сродства к GH. Для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого GH и рекомбинантного человеческого ANXA2 был проведен функциональный иммуноферментный анализ (ИФА) связывания. Кратко: GH серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% бычьим сывороточным альбумином (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые ANXA2, и инкубировали в течение 1 ч при 37°C. Лунки промывали PBS с Tween 20 (PBST) и инкубировали с поликлональными антителами к GH в течение 1 ч, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее лунки инкубировали с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), в течение 1 ч при 37°C, после чего раствор удаляли и проводили пятикратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450/630 нм. Активность связывания рекомбинантного человеческого GH с рекомбинантным человеческим ANXA2 представлена на рисунке 1; значение EC50 для данного эффекта составило 2,1 мкг/мл.