Active Heparanase (HPSE) (APA711Hu04)

Гепараназа (HPSE) избирательно расщепляет гепарансульфат в специфических участках гепарансульфат-протеогликанов (HSPG). HPSE способствует миграции клеток, связанной с метастазированием, заживлением ран и воспалением. Повышение её активности коррелирует с усилением активности VEGF, что дополнительно стимулирует ангиогенез. HPSE также усиливает отщепление синдеканов, повышая инвазию эндотелиальных клеток и ангиогенез при миеломе. Фермент проявляет прокоагулянтную активность, увеличивая генерацию активированного фактора X в присутствии тканевого фактора и активированного фактора VII. Кроме того, HPSE усиливает адгезию клеток к внеклеточному матриксу (ECM) независимо от своей ферментативной активности. HPSE высоко экспрессируется в плаценте и селезенке и слабо - в лимфатических узлах, тимусе, лейкоцитах периферической крови, костном мозге, эндотелиальных клетках, печени плода и опухолевых тканях. Ферментативная активность рекомбинантного человеческого HPSE оценивалась в формате ИФА с использованием биотинилированного по невосстанавливающему концу гепарансульфата на рекомбинантном человеческом синдекане-4 в качестве субстрата. Кратко: 10 мкл различных концентраций rhHPSE смешивали с 10 мкл биотинилированного синдекана-4 в пробирке (в качестве отрицательного контроля использовали 10 мкл буфера для анализа и 10 мкл биотинилированного синдекана-4) и инкубировали 2 ч при 37°C. После инкубации к каждой реакции добавляли 220 мкл PBS с 1% БСА (pH 7,4), затем по 100 мкл каждой пробы вносили в лунки микротитровального планшета, покрытые поликлональными антителами к синдекану-4, и инкубировали 1 ч при 37°C. Лунки трижды промывали PBST, после чего инкубировали со стрептавидин-HRP в течение 30 мин; затем раствор удаляли и лунки промывали 5 раз. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. В результате переваривание 500 нг рекомбинантного человеческого HPSE приводило к снижению оптической плотности более чем на 50% по сравнению с отрицательным контролем.