Active High Mobility Group Protein 1 (HMGB1) (APA399Hu02)

Белок высокой подвижности группы 1 (HMG1) относится к числу важнейших хроматиновых белков. В ядре HMGB1 взаимодействует с нуклеосомами, факторами транскрипции и гистонами, участвуя в организации ДНК и регуляции транскрипции. Поскольку было установлено, что стромальный фактор 1 (SDF1) взаимодействует с HMG1, для детекции данного взаимодействия между рекомбинантным человеческим HMG1 и рекомбинантным человеческим SDF1 был проведен иммуноферментный анализ (ИФА) связывания. Кратко: раствор HMG1 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА), pH 7,4. Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые SDF1, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки лунок буфером PBST в них вносили поликлональные антитела к HMG1 и инкубировали 1 ч, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее добавляли вторичные антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм. Активность связывания HMG1 и SDF1 представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.