Active High Mobility Group Protein 1 (HMGB1) (APA399Hu61)

Белок высокой подвижности группы 1 (HMG1), также известный как белок высокой подвижности группы 1 (HMGB1), относится к семейству белков высокой подвижности и содержит домен HMG-box. HMG1 является одним из ключевых хроматиновых белков; этот ядерный белок участвует в организации ДНК и регуляции транскрипции, поддерживая экспрессию множества генов за счет взаимодействия с различными транскрипционными факторами. HMGB1 секретируется иммунными клетками (такими как макрофаги, моноциты и дендритные клетки) через лидер-независимый секреторный путь. Активированные макрофаги и моноциты выделяют HMGB1 в качестве цитокина-медиатора воспаления. Кроме того, было установлено, что опухолевый белок p53 (TP53) взаимодействует с HMG1. Для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого HMG1 и рекомбинантного человеческого TP53 был проведен иммуноферментный анализ (ИФА) связывания. Кратко: HMG1 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые TP53, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к HMG1, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее лунки инкубировали с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего раствор удаляли и снова проводили трехкратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Результаты, представленные на рис. 1, демонстрируют связывание HMG1 с TP53, которое носит дозозависимый характер.