Active Histone Deacetylase 1 (HDAC1) (APC206Hu01)

Активность связывания гистондеацетилазы 1 (HDAC1) со специфичным белком 1 (Sp1) оценивали методом иммуноферментного анализа (ИФА). Рекомбинантный человеческий HDAC1 последовательно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% бычьим сывороточным альбумином (БСА, pH 7,4). Образцы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые Sp1, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали 1 ч с поликлональными антителами к HDAC1, затем промывали трехкратно. Далее проводили инкубацию с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), с последующей трехкратной промывкой. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37°C. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Результаты, представленные на рисунке 1, демонстрируют дозозависимый характер связывания HDAC1 и Sp1.