Active Indoleamine-2,3-Dioxygenase (IDO) (APB547Hu01)

Индоламин-2,3-диоксигеназа 1 (IDO) представляет собой гемсодержащий фермент, катализирующий первую и лимитирующую стадию катаболизма триптофана с образованием N-формилкинуренина. Фермент действует на различные субстраты ряда триптофана, включая D-триптофан, L-триптофан, 5-гидрокситриптофан, триптамин и серотонин. Биологическая активность рекомбинантного человеческого IDO оценивалась по его способности окислять L-триптофан до N-формилкинуренина с использованием метиленового синего в качестве индикатора. Реакцию проводили в 50 мМ MES-буфере (pH 6,5); процесс инициировали добавлением 50 мкл растворов IDO различной концентрации (разведенных assay-буфером) к 50 мкл субстратной смеси, содержащей 800 мкМ L-триптофана, 9000 ЕД/мл каталазы (RPC418Hu05) и 40 мкМ метиленового синего в assay-буфере, к которой добавляли равный объем 80 мМ аскорбиновой кислоты в 0,405 М Tris-HCl (pH 8,0). В качестве отрицательного контроля использовали лунку без IDO, куда добавляли 50 мкл assay-буфера. Оптическую плотность регистрировали при длине волны 321 нм в кинетическом режиме в течение 5 минут. Результаты подтвердили способность рекомбинантного человеческого IDO окислять L-триптофан; удельная активность фермента составила 10581 пмоль/мин/мкг.