Active Insulin (INS) (APA448Bo01)

Инсулин (INS) представляет собой полипептидный гормон, синтезируемый бета-клетками поджелудочной железы и являющийся ключевым регулятором метаболизма углеводов. Инсулин снижает концентрацию глюкозы в крови, повышает проницаемость клеточных мембран для моносахаридов, аминокислот и жирных кислот, а также ускоряет процессы гликолиза, пентозофосфатного цикла и синтеза гликогена в печени. Поскольку рецептор инсулина (ISR) идентифицирован как партнер взаимодействия INS, для детекции связывания рекомбинантного бычьего INS и рекомбинантного человеческого ISR был проведен иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: INS серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые ISR, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к INS, затем содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее следовала инкубация с вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена (HRP), после чего лунки снова опорожняли и промывали три раза. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм. Активность связывания INS и ISR представлена на рисунке 1; наблюдалась дозозависимая динамика данного эффекта.