Active Insulin Like Growth Factor 1 (IGF1) (APA050Mu01)

На рисунке представлена активность связывания инсулиноподобного фактора роста 1 (IGF1), также известного как соматомедин C, с белком, связывающим инсулиноподобный фактор роста 3 (IGFBP3). IGF1 - гормон, сходный по молекулярной структуре с инсулином, играющий ключевую роль в росте в детском возрасте и сохраняющий анаболические эффекты у взрослых; его синтетический аналог мекасермин применяется для лечения задержки роста. Поскольку IGFBP3 идентифицирован как партнер взаимодействия IGF1, был проведен иммуноферментный анализ (ИФА) связывания для детекции взаимодействия рекомбинантного мышиного IGF1 и рекомбинантного мышиного IGFBP3. Кратко: IGF1 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые IGFBP3, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к IGF1, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее проводили инкубацию с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего раствор удаляли и выполняли трехкратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания IGF1 и IGFBP3 представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.