Active Inter Alpha-Globulin Inhibitor H4 (ITIH4) (APH776Hu03)

Проводили анализ связывания методом ИФА для оценки взаимодействия рекомбинантного человеческого белка ITIH4 (ингибитор интер-альфа-глобулинов 4) и рекомбинантного человеческого белка Grb2 (белок, связывающий рецептор фактора роста 2). ITIH4 последовательно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые Grb2, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к ITIH4, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее вносили вторичное антитело, меченное пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. Добавляли субстратный раствор и инкубировали 15–25 мин при 37°C. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Результаты, представленные на рисунке 1, демонстрируют дозозависимое связывание ITIH4 с Grb2.