Active Interferon Alpha (IFNa) (APA033Mu61)

Белки интерферона-альфа (IFNα) относятся к интерферонам I типа - крупной подгруппе интерферонов, регулирующих активность иммунной системы. IFNα, продуцируемые лейкоцитами, также известны как лейкоцитарный интерферон; они играют ключевую роль в врожденном иммунном ответе на вирусные инфекции. Поскольку интерферон-альфа 13 (IFNA13) идентифицирован как партнер взаимодействия для IFNα, был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия между рекомбинантным мышиным IFNα и рекомбинантным мышиным IFNA13. Кратко: IFNα последовательно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА), pH 7,4. Образцы объемом 100 мкл в двух повторностях вносили в лунки планшета, покрытые IFNA13, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки лунок буфером PBST проводили инкубацию с поликлональными антителами против IFNα в течение 1 ч, затем раствор удаляли и лунки промывали трехкратно. Далее следовала инкубация с вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена (HRP), после чего лунки снова аспирировали и промывали трехкратно. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора в каждую лунку и немедленно измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм. Активность связывания между IFNα и IFNA13 представлена на рисунке 1; наблюдалась дозозависимая динамика этого эффекта.

Вестерн-блоттинг; образец: рекомбинантный интерферон-альфа (IFNα) мыши.