Active Interferon Beta (IFNb) (APA222Mu01)

Интерферон бета (IFNb) относится к семейству интерферонов I типа, крупной подгруппе белков, регулирующих активность иммунной системы; эти белки в больших количествах продуцируются фибробластами и обладают противовирусной активностью, участвуя преимущественно в врожденном иммунном ответе. Описаны два типа IFNb: IFNb1 (IFNB1) и IFNb3 (IFNB3), причем IFNb1 применяется для лечения рассеянного склероза, снижая частоту рецидивов. Поскольку рецептор интерферона альфа/бета 1 (IFNa/bR1) идентифицирован как партнер взаимодействия для IFNb, был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого IFNb и рекомбинантного человеческого IFNa/bR1. Кратко: IFNb серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% бычьим сывороточным альбумином (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые EP300, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к IFNb, после чего содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), лунки снова опорожняли и трехкратно промывали. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания IFNb и IFNa/bR1 представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.