Active Interferon Gamma (IFNg) (APA049Po61)

Интерферон-гамма (ИФН-γ) представляет собой димерный растворимый цитокин, являющийся единственным представителем интерферонов II типа. Его значимость для иммунной системы обусловлена способностью напрямую ингибировать репликацию вирусов, а также оказывать иммуностимулирующее и иммуномодулирующее действие. Димеры ИФН-γ связываются с α-субъединицами рецептора ИФН-γRI, которые затем взаимодействуют с β-субъединицами рецептора ИФН-γRII, формируя функциональный рецепторный комплекс, состоящий из двух α- и двух β-субъединиц; наличие ИФН-γRII повышает сродство связывания лиганда и эффективность передачи сигнала. Для детекции взаимодействия рекомбинантного ИФН-γ свиньи и рекомбинантного человеческого ИФН-γR1 был проведен функциональный ИФА связывания. Кратко: ИФН-γ последовательно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые ИФН-γR1, и инкубировали в течение 1 ч при 37°C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к ИФН-γ, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее лунки инкубировали с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), в течение 1 ч при 37°C, после чего раствор удаляли и проводили пятикратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450/630 нм. Активность связывания рекомбинантного ИФН-γ свиньи и рекомбинантного человеческого ИФН-γR1 представлена на рис. 1; значение EC50 для данного эффекта составляет 0,38 мкг/мл.