Пролиферация клеток MC/9 под действием рекомбинантного IL-10
Интерлейкин-10 (IL-10), также известный как фактор, ингибирующий синтез цитокинов (CSIF), является типичным представителем семейства цитокинов IL-10 с альфа-спиральной структурой, которое также включает IL-19, IL-20, IL-22, IL-24 и IL-26/AK155. Зрелый человеческий IL-10 имеет 72–86% идентичности аминокислотной последовательности с бычьим, собачьим, лошадиным, кошачьим, мышиным, овечьим, свиным и крысиным IL-10. Если человеческий IL-10 активен в отношении мышиных клеток, то мышиный IL-10 не действует на человеческие клетки. IL-10 играет ключевую роль в контроле вирусных инфекций, а также аллергического и аутоиммунного воспаления. Он способствует фагоцитозу и развитию ответов по типу Th2, но подавляет презентацию антигена и провоспалительные реакции типа Th1. Активность IL-10 обычно оценивают в тесте пролиферации клеток с использованием мышиных тучных клеток линии MC/9. Клетки MC/9 высевали в трех повторностях в лунки 96-луночных планшетов в концентрации 8000 клеток/лунку в стандартную среду DMEM с 2% сыворотки, содержащую рекомбинантный куриный IL-4 в различных концентрациях. После инкубации в течение 3 дней клетки исследовали под инвертированным микроскопом, а пролиферацию клеток оценивали с помощью набора Cell Counting Kit-8 (CCK-8). Кратко: в каждую лунку планшета добавляли 10 мкл раствора CCK-8, затем после инкубации планшета в течение 2–4 часов при 37 °C измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм на микропланшетном ридере. Пролиферация клеток MC/9 после 3-дневной инкубации с IL-10, наблюдаемая под инвертированным микроскопом, представлена на рисунке 1. Жизнеспособность клеток оценивали с помощью теста CCK-8 (Cell Counting Kit-8) после 3-дневной инкубации с рекомбинантным куриным IL-10. Результаты представлены на рисунке 2. Было очевидно, что IL-10 достоверно повышал жизнеспособность клеток MC/9. Значение ED50 составило 0,92–9,2 нг/мл.
