Active Interleukin 10 (IL10) (APA056Mu61)

Проведен анализ связывания методом ИФА для оценки взаимодействия рекомбинантного мышиного интерлейкина-10 (IL-10) и рекомбинантного мышиного альфа-субъединицы рецептора IL-10 (IL10Ra). IL-10, также известный как фактор, ингибирующий синтез цитокинов (CSIF), представляет собой противовоспалительный цитокин с множественными плейотропными эффектами в иммунорегуляции и воспалении: он подавляет экспрессию цитокинов Th1, антигенов MHC класса II и ко-стимулирующих молекул на макрофагах, усиливает выживаемость, пролиферацию и продукцию антител В-клетками, блокирует активность NF-κB и участвует в регуляции сигнального пути JAK-STAT. Поскольку IL10Ra идентифицирован как партнер взаимодействия IL-10, проводили следующий анализ: IL-10 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4); по 100 мкл каждого разведения в двух повторностях вносили в лунки планшета, покрытые IL10Ra, и инкубировали 2 ч при 37 °C; после промывки буфером PBST лунки инкубировали 1 ч с поликлональными антителами к IL-10, затем трижды промывали; далее проводили инкубацию с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), с последующей трехкратной промывкой; добавляли субстратный раствор и инкубировали 15–25 мин при 37 °C; реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Результаты (рис. 1) демонстрируют дозозависимое связывание IL-10 с IL10Ra.