Active Interleukin 10 (IL10) (APA056Ra01)

Интерлейкин-10 (IL-10), также известный как фактор, ингибирующий синтез цитокинов человека (CSIF), представляет собой противовоспалительный цитокин, обладающий множественными плейотропными эффектами в иммунорегуляции и воспалении. Он подавляет экспрессию цитокинов типа Th1, антигенов главного комплекса гистосовместимости (МНС) класса II и ко-стимулирующих молекул на макрофагах, а также усиливает выживаемость, пролиферацию В-клеток и продукцию антител. IL-10 способен блокировать активность фактора транскрипции NF-κB и участвует в регуляции сигнального пути JAK-STAT. Исследования показали, что IL-10 преимущественно ингибирует индуцированную липополисахаридом (ЛПС) и бактериальными продуктами секрецию провоспалительных цитокинов (TNFα, IL-1β, IL-12 и IFNγ) из клеток миелоидного ряда, активированных через толл-подобные рецепторы (TLR). Поскольку альфа-субъединица рецептора интерлейкина-10 (IL-10Rα) идентифицирована как партнер взаимодействия для IL-10, был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия рекомбинантного IL-10 крысы и рекомбинантного IL-10Rα крысы. Кратко: IL-10 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые IL-10Rα, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к IL-10, затем содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее следовала инкубация с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего снова проводили удаление содержимого и трехкратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 минут при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длине волны 450 нм. Связывающая активность IL-10 с IL-10Rα представлена на Рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер. Связывающая активность IL-10 с IL-10Rα.