Active Interleukin 12A (IL12A) (APA059Hu01)

Интерлейкин-12A (IL12A) представляет собой субъединицу интерлейкина-12 - цитокина, воздействующего на Т-клетки и естественные киллеры и обладающего широким спектром биологической активности. Интерлейкин-12 является дисульфид-связанным гетеродимером, состоящим из субъединицы массой 40 кДа, кодируемой данным геном, и субъединицы массой 35 кДа, кодируемой геном IL12A. Данный цитокин экспрессируется активированными макрофагами и служит ключевым индуктором дифференцировки Th1-клеток. IL12A способен образовывать комплекс с белком 3, индуцируемым вирусом Эпштейна–Барр (EBI3). В связи с этим был проведен функциональный иммуноферментный анализ (ИФА) связывания для детекции взаимодействия между рекомбинантным человеческим IL12A и рекомбинантным человеческим EBI3. Кратко: IL12A последовательно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые EBI3, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к IL12A, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Затем лунки инкубировали с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длине волны 450 нм. Активность связывания рекомбинантного человеческого IL12A с рекомбинантным человеческим EBI3 представлена на рисунке 1; значение EC50 для данного эффекта составило 38,3 нг/мл.