Active Interleukin 12B (IL12B) (APA058Hu01)

Интерлейкин-12B (IL12B) кодирует субъединицу интерлейкина-12 - цитокина, воздействующего на Т-клетки и естественные киллеры и обладающего широким спектром биологической активности. Интерлейкин-12 представляет собой связанную дисульфидными связями гетеродимерную молекулу, состоящую из субъединицы массой 40 кДа, кодируемой данным геном, и субъединицы массой 35 кДа, кодируемой геном IL12A. Данный цитокин экспрессируется активированными макрофагами и служит ключевым индуктором развития Th1-клеток. IL12B способен связываться с рецептором интерлейкина-12 бета 1 (IL12Rb1). Для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого IL12B и рекомбинантного человеческого IL12Rb1 был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: рекомбинантный человеческий IL12B, конъюгированный с биотином, серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл переносили в лунки микротитровального планшета, покрытые IL12Rb1, и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. Лунки трижды промывали буфером PBST, после чего проводили инкубацию с конъюгатом пероксидазы хрена (HRP) в течение 30 мин; затем раствор удаляли, а лунки промывали пять раз. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания IL12B и IL12Rb1 представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.