Active Interleukin 13 (IL13) (APA060Ra01)

Интерлейкин-13 (IL13) представляет собой цитокин, секретируемый многими типами клеток, в частности T-хелперами 2-го типа (Th2). По своим эффектам на иммунные клетки IL13 схож с близкородственным цитокином IL4. Хотя IL13 преимущественно ассоциирован с индукцией заболеваний дыхательных путей, он также обладает противовоспалительными свойствами. IL13 индуцирует в дыхательных путях класс протеолитических ферментов, известных как матриксные металлопротеиназы (MMP). Кроме того, IL13 способен стимулировать секрецию иммуноглобулина E (IgE) активированными человеческими B-клетками. Поскольку рецептор интерлейкина-13 альфа-1 (IL13Ra1) идентифицирован как партнер взаимодействия для IL13, для детекции взаимодействия рекомбинантного крысиного IL13 и рекомбинантного крысиного IL13Ra1 был проведен иммуноферментный анализ (ИФА) связывания. Кратко: IL13 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые IL13Ra1, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к IL13, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), раствор удаляли и лунки трижды промывали. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длине волны 450 нм. Активность связывания IL13 с IL13Ra1 представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.