Active Interleukin 17D (IL17D) (APD346Hu01)

Интерлейкин-17D (IL17D) относится к семейству IL17, включающему шесть членов (IL-17, IL-17B – IL-17F). Сообщается, что IL17D индуцирует экспрессию IL6, CXCL8/IL8 и CSF2/GM-CSF в эндотелиальных клетках. Поскольку члены семейства IL17 обладают сходством в аминокислотной последовательности и структуре, был разработан связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого IL17D с рекомбинантным человеческим IL17RB. Кратко: IL17D серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,1% бычьим сывороточным альбумином (БСА), pH 7,4. Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые IL17RB, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к IL17D, после чего содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. Затем добавляли вторичные антитела, меченные пероксидазой хрена (HRP), снова удаляли содержимое и трехкратно промывали лунки. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм. Связывающая активность IL17D с IL17RB представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.