Active Interleukin 25 (IL25) (APB694Hu01)

Интерлейкин-25 (IL-25), также известный как IL-17E, способен индуцировать активацию NF-κB и стимулировать продукцию IL-8. Кроме того, данный цитокин обладает гомологией последовательности с IL-17, который является лигандом для рецептора IL-17RA. В связи с этим был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого IL-25 с IL-17RA. Кратко: IL-25 последовательно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS), содержащем 0,1% бычьего сывороточного альбумина (БСА), pH 7,4. Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые IL-17RA, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки лунок буфером PBST проводили инкубацию с поликлональными антителами к IL-25 в течение 1 ч, затем раствор удаляли и выполняли трехкратную промывку. Далее после инкубации с вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена (HRP), лунки снова промывали трехкратно. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длине волны 450 нм. Активность связывания IL-25 с IL-17RA представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.

Рис. Вестерн-блоттинг; образец: рекомбинантный IL-25 человека.