Active Interleukin 33 (IL33) (APB980Hu01)

Интерлейкин-33 (IL-33), принадлежащий к семейству IL-1, является мощным индуктором цитокинов, ассоциированных с Т-хелперами 2-го типа (Th2). IL-33 выступает лигандом для рецептора ST2 (IL1RL1), который высоко экспрессируется на клетках Th2, тучных клетках и врожденных лимфоидных клетках 2-го типа. Экспрессия IL-33 наблюдается в широком спектре клеток, включая фибробласты, тучные клетки, дендритные клетки, макрофаги, остеобласты, эндотелиальные и эпителиальные клетки. Поскольку белок, подобный рецептору интерлейкина-1 (IL1RL1), идентифицирован как партнер взаимодействия IL-33, для детекции данного взаимодействия был проведен иммуноферментный анализ (ИФА) с использованием рекомбинантного человеческого IL-33 и рекомбинантного человеческого IL1RL1. Кратко: IL-33 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые IL1RL1, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к IL-33, затем содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее следовала инкубация с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего снова проводили удаление содержимого и трехкратную промывку. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм. Результаты, представленные на рисунке 1, демонстрируют дозозависимый характер связывания IL-33 с IL1RL1.