Active Interleukin 3 Receptor Alpha (IL3Ra) (APB505Hu61)

Рецептор альфа-субъединицы интерлейкина-3 (IL3RA), также известный как CD123, представляет собой субъединицу функционального высокоаффинного гетеродимерного рецептора человека к IL-3. Альфа-субъединица самостоятельно связывает IL-3 с низкой аффинностью, тогда как бета-субъединица не связывает IL-3 сама по себе, но необходима для высокоаффинного связывания IL-3 гетеродимерным рецепторным комплексом; обе субъединицы относятся к суперсемейству цитокиновых рецепторов. Для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого рецептора альфа-субъединицы интерлейкина-3 и рекомбинантного человеческого интерлейкина-3 был проведен анализ связывания методом ИФА. Кратко: IL-3 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые IL3Ra, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к IL-3, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), раствор удаляли и лунки трижды промывали. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания IL3Ra и IL-3 представлена на рисунке 1.