Active Interleukin 3 Receptor Alpha (IL3Ra) (APB505Mu01)

Рецептор альфа-субъединицы интерлейкина-3 (IL-3Rα), также известный как CD123, представляет собой субъединицу функционального высокоаффинного гетеродимерного рецептора мышиного IL-3; альфа-субъединица самостоятельно связывает IL-3 с низкой аффинностью, тогда как бета-субъединица не связывает IL-3 сама по себе, но необходима для высокоаффинного связывания IL-3 гетеродимерным рецепторным комплексом (обе субъединицы относятся к суперсемейству цитокиновых рецепторов). Для детекции взаимодействия рекомбинантного мышиного рецептора альфа-субъединицы интерлейкина-3 и рекомбинантного мышиного интерлейкина-3 был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: IL-3Rα серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые IL-3, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к IL-3Rα, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее лунки инкубировали с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего раствор удаляли и снова проводили трехкратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длине волны 450 нм. Активность связывания IL-3Rα и IL-3 представлена на рисунке 1; значение EC50 составило 10,66 мкг/мл.