Active Interleukin 3 Receptor Alpha (IL3Ra) (APB505Mu02)

Рецептор альфа-субъединицы интерлейкина-3 (IL-3Rα), также известный как CD123, представляет собой субъединицу функционального высокоаффинного рецептора мышиного IL-3, являющегося гетеродимером. Альфа-субъединица самостоятельно связывает IL-3 с низкой аффинностью, тогда как бета-субъединица не связывает IL-3 сама по себе, но необходима для высокоаффинного связывания IL-3 гетеродимерным рецепторным комплексом; обе субъединицы относятся к суперсемейству цитокиновых рецепторов. Для детекции взаимодействия рекомбинантного мышиного рецептора альфа-субъединицы интерлейкина-3 и рекомбинантного мышиного интерлейкина-3 был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: IL-3Rα серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые IL-3, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к IL-3Rα, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), раствор удаляли и лунки трехкратно промывали. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длине волны 450 нм. Активность связывания IL-3Rα и IL-3 представлена на рисунке 1; значение EC50 составило 0,173 мкг/мл.