Active Interleukin 4 (IL4) (APA077Mu01)

Интерлейкин-4 (IL4) представляет собой цитокин, индуцирующий дифференцировку наивных Т-хелперов (Th0) в Th2-клетки, которые при активации IL4 продуцируют дополнительный IL4 по механизму положительной обратной связи. IL4 выполняет множество биологических функций, включая стимуляцию пролиферации активированных В- и Т-клеток, а также дифференцировку В-клеток в плазматические клетки; он является ключевым регулятором гуморального и адаптивного иммунитета. IL4 индуцирует переключение изотипов В-клеток на IgE и повышает экспрессию молекул MHC класса II, одновременно снижая продукцию Th1-клеток, макрофагов, интерферона-гамма и IL12 дендритными клетками. Поскольку рецептор гамма-цепи интерлейкина-2 (IL2Rg) идентифицирован как партнер взаимодействия IL4, был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия рекомбинантного мышиного IL4 с рекомбинантным мышиным IL2Rg. Кратко: IL4 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые IL2Rg, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к IL4, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), раствор удаляли и снова проводили трехкратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания IL4 с IL2Rg представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер. Активность связывания IL4 с IL2Rg.