Active Interleukin 4 (IL4) (APA077Mu61)

Активность связывания интерлейкина-4 (IL4) с рецептором гамма-цепи интерлейкина-2 (IL2Rg). IL4 является цитокином, индуцирующим дифференцировку наивных T-хелперов (Th0) в Th2-клетки; он играет ключевую роль в гуморальном и адаптивном иммунитете, стимулируя пролиферацию активированных B- и T-клеток, дифференцировку B-клеток в плазматические клетки, переключение изотипа B-клеток на IgE и повышая экспрессию MHC класса II, одновременно подавляя продукцию Th1-клеток, макрофагов, IFN-γ и IL-12 дендритными клетками. Поскольку IL2Rg идентифицирован как партнер взаимодействия IL4, для детекции связывания рекомбинантного мышиного IL4 с рекомбинантным мышиным IL2Rg был проведен иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: IL4 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). По 100 мкл образцов в двух повторностях вносили в лунки планшета, покрытые IL2Rg, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали с поликлональными антителами к IL4 в течение 1 ч, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее вносили вторичные антитела, меченные пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37°C. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Результаты, представленные на рисунке 1, демонстрируют дозозависимый характер связывания IL4 с IL2Rg.