Active Interleukin 4 (IL4) (APA077Ra01)

Интерлейкин-4 (IL4) является цитокином, индуцирующим дифференцировку наивных T-хелперов (Th0) в Th2-клетки, которые при активации IL4 продуцируют дополнительный IL4 по механизму положительной обратной связи. IL4 выполняет множество биологических функций, включая стимуляцию пролиферации активированных B- и T-клеток, дифференцировку B-клеток в плазматические клетки, а также выступает ключевым регулятором гуморального и адаптивного иммунитета. IL4 индуцирует переключение изотипов B-клеток на IgE и повышает экспрессию молекул MHC класса II, одновременно снижая продукцию Th1-клеток, макрофагов, IFN-γ и IL-12 дендритными клетками. Поскольку рецептор гамма интерлейкина-2 (IL2Rg) идентифицирован как партнер взаимодействия для IL4, для детекции связывания рекомбинантного крысиного IL4 с рекомбинантным крысиным IL2Rg был проведен иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: IL4 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые IL2Rg, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали с поликлональными антителами к IL4 в течение 1 ч, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее добавляли вторичные антитела, меченные пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37°C. В завершение добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Результаты, представленные на рисунке 1, демонстрируют дозозависимую активность связывания IL4 с IL2Rg.