Active Interleukin 9 (IL9) (APA081Hu01)

Интерлейкин-9 (IL-9), также известный как P40 и MEA (фактор, усиливающий рост тучных клеток), представляет собой белок с молекулярной массой 30–40 кДа, первоначально идентифицированный у мышей как фактор роста Т-клеток и являющийся членом семейства цитокинов, использующих общую γ-цепь рецептора (включая IL-2, IL-4, IL-7, IL-15 и IL-21). IL-9 продуцируется преимущественно Т-хелперами, такими как Th2 и Th9 клетки. Он функционирует посредством активации пути JAK/STAT и играет критическую роль в иммунном ответе и патогенезе рака. Кальций-связывающий белок S100A6 является рецептором высокого сродства к IL-9. Для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого IL-9 и рекомбинантного мышиного S100A6 был проведен функциональный иммуноферментный анализ (ИФА) связывания. Кратко: IL-9 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые S100A6, и инкубировали в течение 1 ч при 37°C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к IL-9, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее лунки инкубировали с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), в течение 1 ч при 37°C, после чего раствор удаляли и проводили пятикратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450/630 нм. Активность связывания рекомбинантного человеческого IL-9 и рекомбинантного мышиного S100A6 представлена на рисунке 1; значение EC50 для данного эффекта составило 0,09 мкг/мл.