Active Janus Kinase 3 (JAK3) (APF493Hu01)

Янус-киназа 3 (JAK3) представляет собой нерецепторную тирозинкиназу, участвующую в таких процессах, как рост, развитие и дифференцировка клеток. Поскольку было установлено, что белок STAM2 взаимодействует с JAK3, для детекции данного взаимодействия между рекомбинантным человеческим JAK3 и рекомбинантным человеческим STAM2 был проведен иммуноферментный анализ (ИФА) связывания. Кратко: раствор JAK3 подвергали серийным разведениям в фосфатно-солевом буфере (PBS), содержащем 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА), pH 7,4. Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые белком STAM2, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки лунок буфером PBST проводили инкубацию с поликлональными антителами к JAK3 в течение 1 ч, затем раствор удаляли и лунки промывали трехкратно. Далее после инкубации с вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена (HRP), раствор удаляли и лунки снова промывали трехкратно. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длине волны 450 нм. Активность связывания между JAK3 и STAM2 представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.