Active Lecithin Cholesterol Acyltransferase (LCAT) (APJ516Mu01)

Лецитин-холестерин-ацилтрансфераза (ЛХАТ) - это фермент, участвующий во внеклеточном метаболизме плазменных липопротеинов и катализирующий превращение холестерина и фосфатидилхолинов (лецитинов) в эфиры холестерина и лизофосфатидилхолины. Известно, что аполипопротеин А-I (АПОА1) выступает кофактором ЛХАТ. В связи с этим был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции ассоциации ЛХАТ с АПОА1. Кратко: рекомбинантный ЛХАТ крысы серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS), содержащем 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА), pH 7,4. Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые АПОА1, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки лунок буфером PBST их инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к ЛХАТ, затем содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее следовала инкубация с вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена (HRP), после чего снова проводили удаление содержимого и трехкратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания ЛХАТ с АПОА1 представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.